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山楂叶提取物的研究进展
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山楂叶提取物的研究进展

文章出处:西安雨诺生物工程有限公司发表时间:2017-01-10 09:08:22浏览次数:

摘要:全水溶性山楂叶提取物山楂叶总黄酮是一作用广泛、不良反应较少的天然药物,含有大量的黄酮类成分,具有活血化瘀、宣通血脉,理气舒络之功能。对心血管疾病有显著疗效,其广泛的药理作用,为临床应用开辟了广阔的前景。本文综述了近年来对山楂叶提取物的采集期、提取纯化、药理作用、临床应用等方面的研究进展。

关键词:山楂叶提取物 采集研究 提取 纯化 药理作用

山楂叶为蔷薇科植物山里红或山楂的干燥叶,含有多种化学成份,主要有黄酮和三萜两大类,如槲皮素、牡荆素(Vitexin)、牡荆素鼠李糖苷、山柰酚、金丝桃苷、对羟基苯甲苹果酸、熊果酸、山梨醇、盐酸二乙胺等。山楂叶提取物系从山楂叶中提取,有活血化瘀,宣通血脉,理气舒络之功能,是一极具临床应用价值的药物。山楂叶因其独特的药理作用在德国和其它西方国家广泛应用,目前山楂叶提取物治疗老年病和抗衰老方面的药理作用也正在研究之中。国内自二十世纪五十年代,就开始了对山楂叶的研究,随着中药提取和分析技术的现代化,山楂叶提取物的研究取得了很大的进展,其制剂益心酮片、胶囊、滴丸等已广泛应用于临床,现将近年来人们对山楂叶提取物的研究综述如下。

1 采集

王冬梅等研究表明在山楂年生长周期中,山楂叶总黄酮含量有2个高峰期,其中第1个生长高峰期是6月15日~8月1日,总黄酮含量可达85%,其总黄酮含量差异不显著;第2个高峰期在10月1日左右,持续期短暂,且黄酮含量比前一个高峰期低。所以认为山楂叶最佳采收期应为6月中旬至8月初。李宏伟等实验结果亦表明,山楂叶中

的总黄酮和牡荆素鼠李糖苷的含量从5月下旬开始,逐渐增高,到8月份达到最高,然后随着果实的成熟,含量逐渐下降,到10月下旬含量最低。如果以提取山楂叶中的黄酮类化合物为目的,应该选择8月初的山楂叶,此时的总黄酮和牡荆素鼠李糖苷含量都是最高。选择最佳采集期,可充分利用资源,保证其收率和质量,提高利用价值。

2 提取、纯化

211水提法 山楂叶粉碎成小块,加入蒸馏水煮沸,冷却后粗滤,滤液离心分离,浓缩,醇沉,离心分离,滤液浓缩,干燥。本方法操作简单,但纯度较低,除杂较困难。

212乙醇渗漉法取山楂叶,粉碎成粗粉,用乙醇浸渍,进行渗漉,收集漉液,减压浓缩,加水稀释后,用石油醚除去色素,分出水层,用乙酸乙酯振摇提取,提取液减压浓缩至干,即得。本方法为药典收载方法,工艺较成熟稳定,提取物中总黄酮含量较高,可达80%以上。

213超声提取法将山楂叶粉碎,先加石油醚脱脂,然后加60%乙醇超声提取,再回流提取1h,过滤,滤液减压浓缩,得粗品,将粗品溶于乙醇中,过滤,减压蒸馏,依次加入乙醚、乙酸乙酯萃取精制。在传统提取中辅以超声,可破坏细胞壁,利于有效成分的提取,提高产品收率,且这一物理过程不会使有效成分遭受破坏,不失为提取的一种有效途径。

214大孔吸附树脂法 山楂叶加70%乙醇加热回流提取,药液回收至无醇味后加入适量热水离心,离心液上D101型大孔树脂柱吸附,用70%乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩,真空干燥。大孔树脂是20世纪70年代末发展起来的一类有较好吸附性能的有机高聚物吸附剂,近年来,大孔树脂吸附技术已广泛用于中草药有效成分的分离、纯化。使用本方法可富集有效成分、提高其纯度。

215酶法 其工艺流程为:干山楂叶→破碎→酶解→保温浸提→离心→上清液→大孔树脂吸附→50%乙醇溶液洗脱→减压浓缩→烘干→粉碎。对酶解法进行了改进,即酶法提取后,加入ZTC-Ⅱ型天然澄清剂在适宜的温度下澄清,不仅有利于提取液中蛋白质、鞣脂等杂质的絮凝,而且有利于山楂叶总黄酮的浸出,可提高收率和纯度。

216超高压提取法取一定量山楂叶粉末,加入50%乙醇,密封,压力为400MPa,60℃下提取3min。该工艺具有提取效率高、时间短、杂质含量少等优点,但超高压技术用于中药提取,还处于起步阶段,超高压是否影响生物小分子结构等许多问题有待于深入研究。

217微波辅助萃取法取山楂叶粉末,50%乙醇为萃取溶剂,微波功率为240W,采用间歇式辐射方式进行提取。微波辅助萃取是近年来发展起来的一种新型提取技术,利用物质在外加电场的作用下分子发生极化,快速定向转动而发生剧烈碰撞和相互磨擦引起发热,从而促使有效成分的快速溶出和释放。作为一种新的提取工艺,具有穿透力强、操作时间短、有效成分得率高等特点,可节约能源、缩短生产周期。

3 质量控制

山楂叶提取物的主要活性成份为黄酮类,其中牡荆素鼠李糖苷、金丝桃苷含量较高,对其测定方法研究亦较多,大多使用专属性较强的高效液相色谱法,总黄酮则根据黄酮类化合物与金属盐类试剂反应,生成有色络合物,使用紫外-可见分光光度法测定。

311牡荆素鼠李糖苷即5,7,4-三羟基黄酮-8-C-β-D-鼠李糖苷,使用HPLC法,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以四氢呋喃-乙腈-水-磷酸(20∶5∶125∶011)为流动相;检测波长为270nm。

312金丝桃苷使用HPLC法,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-乙腈-四氢呋喃-015%醋酸溶液(1∶1∶1914∶7816)为流动相;检测波长为363nm。

本品成分较为复杂,因此使用专属性较强的高效液相色谱法测定牡荆素鼠李糖苷、金丝桃苷含量,以达到分离分析、提高准确度的目的。在此色谱条件下,牡荆素鼠李糖苷、金丝桃苷均可与其它成分实现良好分离,线性关系、精密度与重复性均良好,回收率高,能准确测定其含量。

313总黄酮以芦丁为对照品,分别加5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液为显色剂,对其进行络合显色,在最大吸收500nm的波长处测定吸光度,绘制标准曲线,测定其总黄酮含量。本方法简便、快速、重现性好,是黄酮类含量测定的经典方法。

4 药理作用与作用机制

411降血压作用山楂叶提取物是通过调整心脏的收缩力和心率来实现降血压作用,维持血压稳定的,且能改善心脏自身的冠心血流循环。还可使心收缩力降低,轻度减缓心率使其间歇期和舒张期都延长,保证心脏有较长的恢复时间,降低心脏的代谢负荷。此外,还有适度的强心作用。

412抗心绞痛机制 李国璜等通过用药前后血液流变学观察,证实山楂提取物通过提高红细胞、血小板的表面电荷,增加血液有形细胞之间斥力使电泳减少,从而达到活血化瘀,降低血液粘度,减少聚集的作用。由于血小板聚集减少,血栓素2(TXA2)释放将大为减少,环磷酸腺苷(cAMP)破坏减少,大大缓解了冠状动脉的痉挛,通过活血化瘀、通脉消郁的机理起到缓解、控制心绞痛的作用。

413对心肌缺血的保护作用 山楂叶总黄酮能减轻缺血再灌注损伤心肌心电图ST段变化,降低心肌组织氧化产物丙二醛(MDA)的含量,显著提高大鼠心肌缺血再灌注后血清中一氧化氮(NO)含量,而且能清除氧自由基,阻断氧自由基的来源,抑制脂质过氧化,使MDA含量降低,保护心肌细胞和血管内皮细胞免受缺血再灌注损害。崔新明等实验结果显示,益心酮滴丸可使血清中磷酸肌酸激酶(CK)、天门冬氨酸转氨酶(AST)及乳酸脱氢酶(LDH)活性明显降低,减少心肌细胞坏死的程度,与对照组比较,益心酮滴丸各剂量组心肌细胞超微结构保持完整,进一步从亚细胞结构方面说明益心酮滴丸对心肌细胞具有保护作用。益心酮在Ca2+通道阻滞作用的机理方面与硝苯吡啶相似,即益心酮能抑制慢通道而防止Ca2+超负荷,它可能在缺血的早期就限制了细胞外Ca2+内流的作用,这可能也是益心酮能够改善缺血-再灌注和保护心肌、减轻心肌损伤的作用机理之一。414对脑缺血的保护作用 山楂叶总黄酮可降低细胞膜通透性,具有膜稳定性,可减轻脑缺血所造成的损伤,改善脑功能;降低血黏度、抑制血小板聚集可使血流速度加快,血栓形成减少,对脑组织的损害减轻,山楂叶总黄酮对脑缺血具有保护作用,其机制正是通过降低血黏度,抑制血小板聚集实现的。刘瑛琳等研究发现山楂叶总黄酮能明显地降低MMP-9(明胶酶B)的表达,减轻血管基底膜和细胞外基质蛋白降解,使血脑屏障(BBB)通透性降低、减轻脑水肿、减少脑梗死面积,进一步减轻脑组织损伤,发挥脑保护作用。另外,山楂叶总黄酮可抑制H2O2诱导的嗜铬细胞瘤细胞株(PC12)细胞凋亡,保护神经元,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。

415对肾缺血的保护作用山楂叶总黄酮能显著降低肾缺血/再灌注(I/R)导致的血清BUN和Scr升高,增加尿量

减少TNF-α和IL-1产生,提高肾组织的SOD活性。减少MDA生成、I/R导致的炎性细胞浸润和聚集、肾组织的炎症反应。可通过抗氧化和抗感染作用减轻I/R肾损伤,有效改善肾功能。

416降血糖、降血脂作用 叶希韵等研究结果表明:山楂叶总黄酮对四氧嘧啶引起的糖尿病小鼠有明显的治疗作用,能明显降低糖尿病小鼠血糖水平,改善糖尿病小鼠血清脂质异常,具有降血脂和减少脂质过氧化形成的作用,减少由于糖尿病引起的动物肝脏中脂质的积累。尤其是具有降低果糖胺和山梨醇水平的作用。

417对高脂血症的作用 匡荣等研究发现,山楂提取物可以降低实验性高脂血症大鼠三酰甘油、升高高密度脂蛋白胆固醇,三酰甘油升高是动脉粥样硬化(As)和冠心病发生的重要因素,高密度脂蛋白(HDL-C)升高被认为是预防冠状动脉硬化的重要因素,说明本品可以用于预防和治疗动脉粥样硬化(As)和冠心病。

418抗氧化、衰老作用 山楂叶提取物可以增加抗氧化物酶活性,对低密度脂蛋白(LDL-C)的氧化修饰具有抑制作用,具有一定的抗氧化作用,能清除羟自由基。黄沛力等研究亦表明,山楂叶提取物可明显抑制MDA生成,对诱发的脂质过氧化反应有阻断作用,对H2O2所致的血红蛋白氧化、红细胞溶血都有明显抑制作用,说明有抗氧化作用,还可减少邻苯三酚自氧化过程中的中间产物,具有与SOD相似的功能,对氧自由基有抑制作用。李莉等研究显示,山楂叶总黄酮能提高组织中抗氧化酶活性,抑制自由基损伤,防止脂质过氧化,有抗衰老作用。目前认为,许多心、脑血管疾病的发生、发展与氧自由基损伤密切相关,肿瘤、冠心病和衰老等均与自由基引起的膜脂质氧化性损伤和DNA受损有关,因此,应深入研究山楂叶提取物的药理作用,为其广阔的临床应用提供基础。

419抗炎与镇痛作用 山楂叶提取物含有丰富的黄酮类化合物,黄酮类化合物的抗炎、镇痛机制与钙离子拮抗有关。权迎春等实验研究结果表明,山楂叶提取物能明显降低小鼠耳肿胀程度,减少小鼠因冰醋酸刺激而引起的扭体反应次数,表明山楂叶提取物具有明显的抗炎及镇痛作用,且大剂量给药时效果更明显。黄酮类化合物可明显减少扭体次数,对此类扭体反应有抑制作用,具有一定的抗炎、镇痛作用。

4110利尿作用 匡锦萍等使用山楂叶提取物对家兔进行了利尿研究,结果表明,其利尿作用温和、缓慢而持久,家兔在给药后尿钠及尿钾浓度与对照组无明显差异,对血钾水平也无明显影响,提示利尿时对电解质影响较小。山楂叶提取物有强心作用,其机理主要是增加心肌血流,改善心肌代谢,有利于丙酮酸和乳酸的代谢,抗缺氧,其利尿作用可能与其强心作用有关。

我国山楂叶资源丰富,价廉易得;山楂叶提取物和化学药物相比,作用温和,毒副作用小,安全低毒;山楂叶提取物药理作用广泛、疗效确切,值得临床推广应用。现临床主要应用于治疗冠心病心绞痛等心血管疾病,因其成份较多,尚有许多机理不甚明确。其临床应用有待于深入研究,进一步开拓,应引起药物研究者和临床工作者的重视。

全水溶性山楂叶总黄酮水溶液

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